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如何結(jié)合需求購買離心機?PBMC 單核細胞的密度梯度離心分離篇

更新時間:2020-01-10      點擊次數(shù):2963

      測定細胞免疫功能首先要從人或動物外周血或組織中獲取有活性的細胞,如淋巴細胞、巨噬細胞、粒細胞等。血液主要由血清和血細胞組成,主要包括紅細胞,白細胞和血小板等。白細胞還可以細分為淋巴細胞和單核細胞等。由于這些細胞具有簡單的細胞核,統(tǒng)稱為外周血單核細胞 (PBMC)。 取得有活性的細胞應(yīng)根據(jù)不同的實驗、檢驗和治療的目的,采用不同方法,需要考慮的因素有:1細胞純度,2細胞獲得量,3細胞活力,4使用方法的簡易程度和本室條件等。PBMC 單核細胞可通過 Ficoll 密度梯度離心的方法,從血液中進行分離。

       在 Ficoll 密度梯度離心的過程中,需要注意的有:
● 使 Ficoll-Paque Plus 和 PBS 升至室溫,并用 70% 乙醇消毒血袋外部,良好的溫度 (18-20℃) 控制有利于穩(wěn)定 Ficoll 的密度,可以實現(xiàn)更好的分離效果
● 血液與 PBS 的比例保持 1:1,擰緊蓋后顛倒混合幾次
● 可以使用 ep 25 mL 錐底管,并輕輕的將血液/PBS 混合物鋪置 Ficoll 上
● 離心參數(shù):400 x g, 20 ℃,加減檔 0/0,防止離心結(jié)束后的剎車震動,防止產(chǎn)生重懸,更利于良好分層。隨后開啟“Atset”功能,可以在達到轉(zhuǎn)速后開始計時,離心 30 分鐘
● 使用 PBS 洗滌細胞,離心除去殘余的 Ficoll 液,400 x g, 20 ℃,10 分鐘,重復(fù)幾次
       綜上所述,一臺搭配了適當?shù)乃睫D(zhuǎn)子的 5804R 多用途離心機會是您入門級的選擇,同時又不失其專業(yè)性。
 

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